ベータ

Dec 11, 2023

Communications Medicine volume 3、記事番号: 75 (2023) この記事を引用

487 アクセス

1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

新型コロナウイルス感染症（COVID-19）のパンデミックが始まって以来、感染力の増加、より重篤な疾患、および/またはワクチンの有効性の低下の証拠があるいくつかの懸念される変異体（VOC）が出現しています。 現在および将来の VOC に対する広範な防御免疫を達成するには、効果的な COVID-19 ワクチン戦略が必要です。

私たちは、一次試験で祖先D614株のSARS-CoV-2融合前安定化スパイク三量体とAS03アジュバントを含む変異体ベータ株（CoV2 preS dTM-AS03）を含む二価組換えワクチン製剤を使用して、マカクザルとハムスターで免疫原性および攻撃試験を実施しました。予防接種の設定。

二価CoV2 preS dTM-AS03による一次免疫は、祖先免疫と比較して、オミクロンBA.1およびBA.4/5を含むVOC、およびSARS-CoV-1に対するより広範かつ持続性のある（1年間）中和抗体反応を誘発することを示す。未処理の非ヒト霊長類に対する D614 またはベータ変異体一価ワクチン。 さらに、二価製剤は、ハムスターにおける SARS-CoV-2 プロトタイプ D614G 株およびアルファおよびベータ変異株によるウイルス攻撃に対する防御を与えます。

私たちの発見は、ベータ含有二価CoV2 preS dTM-AS03製剤が、ナイーブ集団において広範囲かつ持続的な免疫原性とVOCに対する保護を提供する可能性を実証しています。

SARS-CoV-2 は時間の経過とともに変化し、その結果、変異型と呼ばれるさまざまな形態のウイルスが発生しました。 これらの変異体は、新型コロナウイルス感染症ワクチンの防御機能を損なうもので、スパイクタンパク質が異なるため、ウイルスのスパイクタンパク質に対する免疫反応を引き起こし、ウイルスがヒトの細胞に付着して感染することを可能にします。 ここでは、元の武漢株由来のものとベータ変異株由来のものの 2 つの異なるスパイクタンパク質を含むワクチンを開発し、テストしました。 マカクザルでは、このワクチンにより、オミクロンを含む、試験されたすべての変異体がヒト細胞に感染するのを阻止できる抗体が、1年間にわたって安定したレベルで産生される。 ハムスターでは、ワクチンは祖先ウイルスとアルファおよびベータ変異体の感染を防ぎました。 私たちの発見は、懸念される既存および将来のSARS-CoV-2変異種のワクチン管理に重要な意味を持ちます。

コロナウイルス感染症 (COVID-19) の原因となる重症急性呼吸器症候群コロナウイルス 2 (SARS-CoV-2) は、2019 年末に出現しました。パンデミックの最初の 6 か月間で、スパイク抗原 (D614G) に単一の変異を持つ変異体が発生しました。 ）、循環している祖先の武漢株（D614）を置き換えました。 しかし、相対的な遺伝的安定性は、スパイク抗原に複数の変異を示す懸念変異株（VOC）が先行株に次々と取って代わられ、世界中で複数回の感染の波を引き起こした最初の1年後に終わりました。 いくつかの VOC (アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ、およびオミクロン BA.1) が、非常に多様なオミクロンのサブバリアントとともに特定されており、その一部は欧州疾病予防管理センター (BA.1) によって新しい VOC として分類されています。 4 および BA.5)1. SARS-CoV-2 の進化は以前の予想よりも速いスピードで続いており、ワクチン接種を受けた個人におけるオミクロン症候性疾患の発生率が高いことからわかるように、現在は主に免疫逃避によって引き起こされています2。 記録的な速さで複数のワクチンの使用が承認されましたが、承認されたワクチンはすべてもともと祖先 D614 株を標的とするように設計されていました 3,4。

SARS-CoV-2 が風土病であり、その重症度は予測不可能であることが現在では十分に確立されています5。 したがって、既存および将来の変異株に対して広範かつ永続的な防御を提供する、最適化された変異耐性の新型コロナウイルスワクチンに対する緊急の満たされていないニーズが存在します。

他の Omicron 亜系統 (BA.2、BA.2.12.1、BA.4、BA.5、BQ.1、BQ.1.1 …) による BA.1 の継続的な急速な置き換えにより、同様に高い免疫回避が見られるためです。 BA.16、7、8、9 より感染率が低いため、新たな変異体を追跡する現在のワクチン戦略は、初回免疫だけでなく追加接種についても再評価する必要があります 10、11。 実際、次世代のワクチン戦略では、将来の循環VOC12に対するリスクにさらされている幼い子供など、ワクチン接種を受けていない未接種の人々に対する効率的な保護に取り組む必要があります。

私たちは最近、AS03 アジュバントと配合された D614 配列に基づく可溶性融合前安定化スパイク三量体 (CoV2 preS dTM) が、ナイーブな成人において良好な安全性プロファイルと祖先株に対する高い免疫原性を誘発することを示しました 13。 さらに、感作ザルにおいて、CoV2 preS dTM-AS03 (D614 またはベータ) の追加ブースター 1 回投与により、祖先ウイルスに対する中和抗体 (nAb) が強化され、複数の VOC (アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ) まで中和が拡張されることを実証しました。 、オミクロン）および SARS-CoV-114、15。 新型コロナウイルス感染症（COVID-19）ワクチン接種を受けた個人における追加免疫としてCoV2 preS dTM-AS03を評価する2件の臨床試験からの予備データは、これらの結果を確認し、D614一価mRNAまたはサブユニットワクチンと比較したベータ一価ワクチン製剤の優位性をさらに示唆しました16、17。

今回我々は、マカクザルとハムスターの一次免疫設定における、祖先D614株とベータ株（B.1.351）の融合前安定化スパイク三量体を含む二価組換えワクチン製剤の免疫原性と防御力を報告する。 ベータ スパイク配列は、主に 3 つの RBD 変異 (K417N、E484K、および Y501N) に起因するプロトタイプのワクチン誘導性中和抗体に対する重要な免疫回避に基づいて選択されました 18、19、20、21。 未処理のカニクイザルとハムスターに一価（D614 またはベータ）または二価（D614 + ベータ）の CoV2 preS dTM-AS03 ワクチン候補をワクチン接種し、ワクチン相同株、オミクロン亜変異体および SARS を含む幅広い VOC パネルに対する中和抗体反応を評価しました。 -CoV-1、記憶B細胞、中和抗体反応の持続性。 ベータ含有ワクチン製剤によってもたらされる防御は、プロトタイプ D614G、アルファ、またはベータ変異体による攻撃後にワクチン接種されたハムスターで評価されました。

私たちのデータは、祖先/ベータ型二価CoV2 preS dTM-AS03ワクチン候補による初回免疫が最長1年間持続的な中和抗体反応を誘発し、Omicron BA.1およびBA.4を含むSARS-CoV-2 VOCに対して最も広範囲に適用されることを示しています。 /5 は、ナイーブな非ヒト霊長類 (NHP) の SARS-CoV-1 に対しても同様に効果を発揮し、ハムスターではプロトタイプ D614G、アルファ、またはベータ変異体攻撃に対する保護を与えます。

AS03アジュバントを含み、一価または二価ワクチンとして製剤化されたワクチン候補CoV2 preS dTM D614またはベータは、参考文献に以前に記載されています。 14、22。

簡単に言うと、CoV2 preS dTM ワクチン候補は、安定化された融合前三量体組換え SARS-CoV-2 S タンパク質で構成されています。 CoV2 preS dTM (D614) とベータは、それぞれ武漢 YP_009724390.1 配列と B.1.351 配列 (GISAID Accession EPI_ISL_1048524) に基づいて設計されており、S2 ドメインに 2 つのプロリンがあり、フリン切断部位の変異と膜貫通構造が置換されています。 T4フォールドン三量体化ドメインによる領域。 CoV2 preS dTM D614 またはベータは、昆虫細胞バキュロウイルス発現システムに基づいたサノフィ独自の細胞培養技術を使用して生成されました。 CoV2 preS dTM D614 またはベータには、GSK の AS03 アジュバントが配合されています。

チャレンジに使用された SARS-CoV-2 ウイルスストックは、Biodefense and Emerging Infections Research Resources Repository (BEI Resources) から入手した種子から Bioqual で調製されました。 SARS-CoV-2 USA/NY-PV08449/2020 (D614G) 株は BEI 種子株 NR-53515 に由来し、ロット番号 091620-230 が割り当てられました。 ストック力価は 9.8 × 104 TCID50/mL (VeroE6 の場合)、Vero TMPRSS2 では 5 × 107 TCID50/mL です。 SARS-CoV-2 アルファ変異体 (B.1.1.7) ストックは BEI 種子ストック NR-54011 に由来し、ロット番号 012921-1230 が割り当てられました。 ストック力価は、Vero TMPRSS2 で 1.58 × 107TCID50/mL および 1.38 × 106 PFU/mL です。 SARS-CoV-2 ベータ変異体 (B.1.351) ストックは BEI 種子ストック NR-54974 に由来し、ロット番号 030621-750 が割り当てられました。 VeroE6 細胞および Vero TMPRSS2 細胞のストック力価は、TCID50 およびプラークアッセイの両方によって決定されました。 力価は、VeroE6 では 5 × 105 TCID50/mL、Vero TMPRSS2 では 1.99 × 108 TCID50/mL です。

レンチウイルスベースのシュードウイルス中和アッセイで使用したレポーターウイルス粒子 (RVP)-GFP は、Integral Molecular から入手しました (表 1)。

レンチウイルスベースのシュードウイルス中和アッセイに使用した 293T-hsACE2 クローン細胞 (Integral Molecular、カタログ番号 C-HA102) は、Integral Molecular から入手し、製造業者の指示に従って増殖させました。

Vero TMPRSS2 細胞 (NIAID ワクチン研究センターの Adrian Creanga から入手) をダルベッコ改変イーグル培地 (DMEM) + 10% ウシ胎児血清 (FBS) + ゲンタマイシン中で増殖させました。

動物実験は、研究施設の動物管理使用委員会 (IACUC) から承認された動物プロトコールに従って、米国国立衛生研究所の関連するすべての規制に従って実施されました。 NHP の研究はルイジアナ大学ラファイエット校ニューイベリア研究センターで実施され、ハムスターの研究は Bioqual で実施されました。

2～8 歳のカニクイザルを、性別、年齢、体重に基づいてランダム化しました。 グループは、2 匹または 3 匹のメスと 4 匹または 3 匹のオスを含む 6 匹の動物で構成されました。 マカクザルは、D0 と D21 に、異なるワクチン製剤 (AS03 アジュバントを含む) を筋肉内経路で三角筋にワクチン接種しました: 一価祖先スパイク D614 (5 または 10 μg)、一価ベータ変異体スパイク (5 または 10 μg)、または二価 D614 + ベータ(5 μg + 5 μg) (図 1)。 他の2つのグループには、0日目に一価D614(5μg)を投与し、21日目に一価ベータ(5μg)または二価D614+ベータ(5μg+5μg)から構成される異種ワクチンを投与した。

6匹のカニクイザルからなる5つのグループを、0日目(D0)と21日目(D21)にCoV2 preS dTM-AS03ワクチン候補で筋肉内免疫した。 一価の祖先 D614 およびベータ (B.1.351) ワクチン候補を、2 つの異なる抗原用量 (5 μg および 10 μg) で使用しました。 二価候補 D614 + Beta を 5 μg + 5 μg で使用しました。

血液サンプルは、免疫化の前に、D0およびD21、ならびにD34、D70、D114、D206、およびD365に収集されました。

生後6～8週目のメスのゴールデンシリアンハムスターを体重に基づいてランダム化した。 ワクチン候補は、D0 と D21 に後肢の大腿四頭筋への筋肉内経路により投与されました。 グループあたり 24 匹のハムスターに、一価 D614 1 μg またはベータ 1 μg、または二価 D614 + ベータ 1 μg + 1 μg のいずれかをワクチン接種しました。 血液サンプルは、免疫化前 (D0 および D21) と D35 に採取されました。 2回目の投与から28日後、各グループ8匹のハムスターに、9.8×103 TCID50（VeroE6）のNY株（D614G）または5×102 TCID50（VeroE6）のベータ、または1.6×106 TCID50のアルファを鼻腔内経路で投与した。 、（Vero TMPRSS2）感染量は、攻撃後 7 日間で 10 ～ 20% の体重減少をもたらすと以前に決定されています。 体重は、研究の終了まで、すなわち攻撃後４または７日まで、各時点ごとのグループあたりの動物の数の半分について毎日モニタリングした。 ウイルス量および病理学的評価のために、攻撃後 4 日または 7 日後に肺を採取しました。

回復期ヒト血清パネル (N = 93) を販売業者 (Sanguine Biobank、iSpecimen、PPD) から入手しました。 血清サンプルは、2020年に新型コロナウイルス感染症（COVID-19）のPCR陽性診断を受けてから3カ月以内に採取された。

抗 SARS-CoV-2 免疫グロブリン (ヒト) の WHO 国際標準 (NIBSC コード: 20/136) も、任意の単位に対するアッセイの正確なキャリブレーションを可能にするために使用され、それによって研究室間のばらつきが減少し、共通言語が作成されました。データのレポート用。

このアッセイは参考文献に以前に記載されています。 14. Mu (B.1.621) および Omicron BA.4/5 バリアントがシュードウイルスのパネルに追加されました (表 1)。

血清サンプルを培地 (FluoroBrite フェノールレッドフリー DMEM + 10% FBS + 10 mM HEPES + 1% PS + 1% Glutamax) で 1:4 または 1:20 に希釈し、56 °C で 30 分間熱不活化しました。 さらに、熱不活化血清の２倍１１点希釈系列を培地中で実施した。 希釈した血清サンプルを、以下の表 (表 1) に記載されているレポーター ウイルス粒子 (RVP)-GFP (Integral Molecular) と混合し、ウェルあたり感染性粒子が約 300 個含まれるように希釈し、37 °C で 1 時間インキュベートしました。 75 μL 容量の約 50% コンフルエント 293T-hsACE2 クローン細胞 (Integral Molecular、カタログ番号 C-HA102) の 96 ウェル プレートに、50 μL の血清 + ウイルス混合物を接種し、37 °C で 72 時間インキュベートしました。 72 時間のインキュベーションの終わりに、プレートをハイコンテント イメージャーでスキャンし、個々の GFP 発現細胞を計数しました。 中和抗体力価は、試験におけるウイルスプラークの数を 50% 減少させる希釈率の逆数として報告されました。

水疱性口内炎ウイルス（VSV）-祖先D614シュードウイルス適格アッセイ（Nexelis、Laval、Canada）を前述のように実施した。 簡単に説明すると、SARS-CoV-2スパイク（武漢）を持ち、検出用のルシフェラーゼレポーターを発現する改変水疱性口内炎ウイルス（VSVΔG）バックボーンから偽型ウイルス粒子を生成した。 熱不活化血清の 2 倍段階希釈物を 75,000 ～ 300,000 の相対発光単位 (RLU) と混合し、37 °C、5% CO2 で 60 分間インキュベートしました。 次に、混合物を、VeroE6 細胞を事前に一晩播種した 96 ウェル プレートに移し、37 °C、5% CO2 で 20 時間インキュベートしました。 ルシフェラーゼ基質の添加後、プレートの発光をSpectramax 340PC Versamaxで読み取った。 RLU で定量化される発光の強度は、血清中に存在する中和抗体に反比例します。 中和抗体力価は、血清の非存在下で測定された RLU の 50% 減少をもたらす血清希釈の逆数として計算されました。

S 特異的 IgG は間接 ELISA を使用してアッセイされました。 Nunc マイクロウェル プレートを、PBS 中の 0.5 μg/mL の Spike SARS-CoV S-GCN4 タンパク質 (GeneArt、Expi 293 細胞株で発現) で 4 °C で一晩コーティングしました。 プレートを PBS-Tween 0.1% で 3 回洗浄した後、PBS-Tween 0.1% 中の 1% BSA で 1 時間ブロックしました。 熱不活化サンプルを 1:450 の初期希釈でプレーティングし、続いてブロッキング緩衝液で 3 倍、7 点連続希釈でプレーティングしました。 室温で１時間インキュベートした後、二次抗体を添加する前にプレートを３回洗浄した。 プレートを室温で１時間インキュベートし、３回洗浄した。 Pierce 1-Step Ultra TMB-ELISA Substrate Solution を 6 分間使用してプレートを展開し、TMB STOP 溶液で停止しました。 プレートをSpectraMax®プレートリーダーで450nmで読み取り、Softmax® Pro 6.5.1 GxPソフトウェアおよび独自のソフトウェアSanofi Universal Exporter 2.1を使用してデータを分析しました。 抗体力価は、0.2-OD カットオフに等しい最高希釈として報告されました。

メモリー B 細胞は、Human IgG Single-color B cell ELISpot キット (CTL、CAT# NC1911372) を使用して分析されました。 凍結保存された PBMC は 37 °C のウォーターバスで急速に解凍されました。 ウシ胎児血清 (FCS) /DNAse I (200 単位/mL) 混合物を PBMC にゆっくりと加えた後、完全細胞培養培地 (CM) (10% FCS および抗生物質カクテルを含む RPMI-1640) に移しました。 遠心分離し、6 mL の CM に再懸濁した後、PBMC を 6 ウェルプレートに移し、37 °C、5% CO2 で 1 時間インキュベートしました。 次に、B-Poly-STM を 1:1000 希釈で添加し、37 °C、5% CO2 で 4 日間細胞刺激を行いました。

事前に刺激した PBMC を収集し、室温 (RT) で 433 × g で 5 分間遠心分離しました。 洗浄後、Guava® easyCyte セルカウンターを使用して PBMC を計数し、細胞を CM で所望の濃度に調整しました。

PVDF 膜を備えた 96 ウェルプレートを 15 μL の 70% エタノールで最大 1 分間透過処理し、その後 80 μL のヒト Ig 捕捉抗体でコーティングする前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で 1 回洗浄しました。 (Ab) 1:50 に希釈したもの、または SARS-CoV2 S-GCN4 タンパク質、武漢株 (GeneArt、Expi 293 細胞株で発現) または BA.5 株 (Sino Biologicals、HEK293 細胞で発現) で 4 µg/mL で希釈、またはPBSで。 プレートを4℃で一晩インキュベートし、滅菌PBSで3回洗浄し、室温で1時間CMで洗浄した。 次に CM を除去し、S-GCN4 タンパク質 (武漢または BA.5 株) および PBS コートウェルには 3 × 105 細胞/ウェルで PBMC を添加し、Ig 捕捉 Ab コートウェルには 5 × 103 細胞/ウェルで PBMC を添加しました。 100 μL/ウェル未満。 各条件を 2 回ずつテストし、プレートを 37 °C、5% CO2 で 18 時間インキュベートしました。

抗体分泌細胞を明らかにするために、プレートを最初に PBS で 2 回、次に 0.05% Tween PBS で 2 回洗浄し、その後抗ヒト IgG 検出溶液を 80 μL 未満で添加しました。 室温で 2 時間インキュベートした後、プレートを 0.05% Tween PBS で 3 回洗浄し、三次溶液を 80 μL で加えました。 プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ＰＢＳで２回、蒸留水で２回洗浄した。 青色の現像液を 80 μL 未満で加え、室温で 15 ～ 20 分間インキュベートしました。 平板膜を水ですすぐことにより反応を停止させ、デカントを３回行った。 プレートを風乾し、Cytation 7 アナライザーを使用してスキャンして読み取りました。 ＰＢＳのみ（バックグラウンド）を含むスポットの数を、Ｓ特異的または総ＩｇＧスポットの数から差し引いた。 結果は、100 万 PBMC あたりの S 特異的 IgG 分泌メモリー B 細胞、およびすべての循環 IgG 分泌メモリー B 細胞中の S 特異的 IgG 分泌メモリー B 細胞の割合として表されます。

THP-1 細胞 (ATCC) は、10% ウシ胎児血清 (FBS)、5% ペニシリン/ストレプトマイシン (Corning、50 μg/mL)、5% l-グルタミン (Corning) を添加した RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) で維持されました。 、4 mM）、5% HEPES 緩衝液（pH 7.2）（Corning、50 mM）、および 0.5% 2-メルカプトエタノール（Gibco、275 μM）、37 °C、5% CO2。 ADCP は参考文献で前述したように実行されました。 23. 簡単に説明すると、D614 スパイク、ベータ スパイク、またはオミクロン スパイク (Sino Biological) をビオチン化し、黄緑色の NeutrAvidin FluoSpheres (Invitrogen) に結合させました。 免疫複合体は、抗原結合ビーズを、PBSで1:100に希釈した血清と混合することによって形成した。 免疫複合体を37℃で2時間インキュベートし、PBSで洗浄しました。 THP-1 細胞を 1.25 × 105 細胞/mL の濃度で免疫複合体に添加し、37 °C、5% CO2 で一晩インキュベートしました。 THP-1 細胞によるビーズの取り込みを促進する抗体の能力を、BD LSR II サイトメーターを使用したフローサイトメトリーによって評価しました。 PhagoScore は次のように計算されました: (% ビーズ + 細胞 × 細胞の幾何平均)/10000。 サンプルは二重に実行され、データは二重の平均を表します。

ADNP は、参考文献で以前に説明されているように実行されました。 24. 末梢全血は、ラゴン研究所によって健康なボランティアから収集されました。 ボランティアは署名済みの同意書を提供しており、年齢は 18 歳以上で、匿名化されていました。 この研究は、MGH 治験審査委員会によって承認されました。 赤血球は塩化アンモニウムカリウム（ACK）溶解によって溶解されました。 白血球を PBS で洗浄し、10% ウシ胎児血清 (FBS) (Sigma-Aldrich)、5% ペニシリン/ストレプトマイシン (Corning、50 μg/mL) を添加した RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) 培地で維持しました。 % l-グルタミン (Corning、4 mM)、5% HEPES 緩衝液 pH 7.2 (Corning、50 mM)、およびアッセイ期間中 37 °C、5% CO2。 黄緑色の NeutrAvidin FluoSphere を、ADCP について説明したように抗原に結合させました。 PBSで1:50に希釈した血清を結合ビーズと混合し、37℃で2時間インキュベートすることによって免疫複合体を形成しました。 免疫複合体を洗浄し、白血球を 2.5 × 105 細胞/mL の濃度で添加しました。 細胞を免疫複合体とともに37℃で1時間インキュベートしました。 PacBlue 抗 CD66b (BioL​​egend、クローン: UCH71) を使用して好中球を染色しました。 食作用は、iQue (Intellicyt) を使用したフローサイトメトリーによって測定されました。 好中球（CD66b+）による食作用は、ADCPについて記載されているように計算されました。 実験は 2 人のドナーで行われ、報告された値は 2 人のドナーの平均です。

ADCD は、参考文献で以前に説明されているように実行されました。 25. ADCPについて説明したように、Red NeutrAvidin FluoSphereを抗原に結合させました。 免疫複合体は、PBSで1:10に希釈した血清を結合ビーズと混合し、37℃で2時間インキュベートすることによって形成されました。 免疫複合体を洗浄し、カルシウムおよびマグネシウムを含むゼラチンベロナール緩衝液（Sigma-Aldrich）で希釈した凍結乾燥モルモット補体（Cedarlane）を免疫複合体に添加し、37℃で20分間インキュベートしました。 Ｃ３沈着は、抗モルモットＣ３ ＦＩＴＣ（ＭｐＢｉｏ）によって測定した。 BD LSR IIサイトメーターを使用して蛍光を取得しました。 C3 の沈着は、FITC の蛍光強度の中央値として報告されます。 実験は 2 回実行され、報告された値は 2 回の反復の平均です。

ADNKA は参考文献で前述したように実行されました。 26. ELISA プレートを 2 μg/mL の抗原でコーティングし、37 °C で 2 時間インキュベートしました。 プレートをPBSで洗浄し、5%ウシ血清アルブミン(BSA)を用いて4℃で一晩ブロックした。 バフィーコートは、署名された同意書を提供した18歳以上の健康なドナーからマサチューセッツ総合病院によって収集されました。 サンプルは使用前に匿名化されました。 NK 細胞は、RosetteSep (STEMCELL Technologies) を使用して軟膜から単離され、次にフィコール勾配を使用して分離されました。 NK 細胞を、10% ウシ胎児血清 (FBS) (Sigma-Aldrich)、5% ペニシリン/ストレプトマイシン (Corning, 50) を添加した R10 (RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) 培地) 中で 37 °C、5% CO2 で一晩静置しました。 μg/mL)、5% l-グルタミン (Corning、4 mM)、5% HEPES 緩衝液 (pH 7.2) (Corning、50 mM)) に 2 ng/mL IL-15 を添加。 翌日、プレートを洗浄し、PBSで1:25に希釈したサンプルをプレートに加えた。 プレートを 37 °C で 2 時間インキュベートし、洗浄し、抗 CD107a-フィコエリトリン (PE)-Cy5 (BD Biosciences、ロット番号 0149826) を添加した R10 培地に 2.5 × 05 細胞/mL の濃度で NK 細胞を添加しました。 、１：１０００希釈）、ブレフェルディンＡ（１０μｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、およびＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。 プレートを37℃で5時間インキュベートした。 インキュベーション後、抗 CD3 パシフィック ブルー (BD Biosciences、クローン G10F5)、抗 CD16 アロフィコシアニン (APC)-Cy5 (BD Biosciences、クローン 3G8)、および抗 CD56 PE-Cy7 (BD) で細胞の表面マーカーを染色しました。 Biosciences、クローン B159) を室温で 15 分間処理します。 細胞をPermA (Life Technologies)で固定し、PermB (Life Technologies)で透過処理し、抗MIP-1β PE (BD Biosciences)および抗IFNガンマFITCで室温で15分間染色した。 蛍光は、BD LSR IIを使用したフローサイトメトリーによって分析されました。 NK細胞はCD56 + CD16 + CD3-としてゲートされ、活性はCD107a、MIP-1b、またはIFNg陽性のNK細胞のパーセントとして決定されました。 このアッセイは 2 人のドナーを用いて行われ、報告されたデータは 2 人のドナーの平均を表しています。

抗原特異的抗体アイソタイプ力価および Fc 受容体 (FcR) - 結合は、参考文献に以前に記載されているように、マルチプレックス Luminex アッセイによって決定されました。 27. カルボキシル化メガプレックスミクロスフェア(Luminex)を、Sulfo-NHSおよびEDC(Thermo Fisher)の添加によりNHS-エステル結合を使用して抗原に共有結合させた。 抗原結合ミクロスフェアに希釈血清を添加することによって免疫複合体を形成し、プレートを700 rpmで振盪しながら4℃で一晩インキュベートしました。 翌日、プレートを0.1% BSAおよび0.02% Tween-20で洗浄した。 抗体アイソタイプ力価の検出のために、PE結合マウス抗ヒト検出抗体(Southern Biotech)をプレートに添加した。 FcR結合の検出のために、Aviタグ付きヒトFcR（Duke Human Vice Institute）を、製造業者の指示に従ってBirA500キット（Avidity）を使用してビオチン化し、ストレプトアビジン-PEでタグ付けした。 PEタグ付きFcRを免疫複合体に追加しました。 蛍光は iQue (Intellicyt) を使用して取得し、データは蛍光強度中央値 (MFI) を表します。 Luminex アッセイは 2 回実行され、報告されたデータは 2 回の平均を表しています。 各 Luminex アッセイは、同じ抗原に対して複数の希釈を使用して実行されました。 代表的なデータを示した。

ＴＣＩＤ５０アッセイは、サンプルの１０倍段階希釈物をＴＭＰＲＳＳ２単層に添加することによって実施した。 具体的には、Vero TMPRSS2 細胞 (NIAID ワクチン研究センターの Adrian Creanga から入手) を 25,000 細胞/ウェルで DMEM + 10% FBS + ゲンタマイシンに播種し、培養物を 37 °C、5% CO2 でインキュベートしました。 培地を吸引し、180μLのDMEM + 2% FBS + ゲンタマイシンと交換した。 ２０μＬのサンプルを４連で一番上の列に加え、Ｐ２００ピペッターを５回使用して混合した。 ピペッターを使用して、20 μL を次の列に移し、プレート上で繰り返し (列 A ～ H)、10 倍希釈を表します。 チップは列ごとに配置され、最後の列まで繰り返されました。 陽性（アッセイにおける既知の感染力価のウイルスストック）および陰性（培地のみ）対照ウェルが各アッセイ設定に含まれた。 プレートを 37 °C、5% CO2 で 4 日間インキュベートしました。 細胞単層の細胞変性効果 (CPE) を視覚的に検査しました。 TCID50 値は、Read-Muench 式を使用して計算されました。 CPE陽性ウェルが3つ未満のサンプルの場合、リード・ミュンヒ式を使用してTCID50を計算することはできず、これらのサンプルには検出限界未満の力価が割り当てられました（すなわち、チャレンジプロトタイプD614G 1.569 TCID50/グラム、チャレンジアルファ1.652） TCID50/グラムおよびチャレンジベータ1.550 TCID50/グラム）。 最適なアッセイ性能を得るには、陽性対照の TCID50 値が期待値の 2 倍以内になるようにテストする必要があります。

ハムスターの左肺全体のサンプルを 10% 中性緩衝ホルマリン (NBF) に収集し、日常的に処理し、パラフィン包埋しました。 パラフィンブロックを約 5 ミクロンで切片にし、ヘマトキシリンおよびエオシン (H&E) を使用して染色しました。 学会認定の獣医病理学者が、H&E スライドを盲目的に肺の病理について定性的および半定量的に評価しました。 半定量的スコアは、影響を受けた肺の割合に基づいて作成されました。 正常組織と一致する肺にはスコア 0 が割り当てられました。切片の 25% 未満で組織病理学が明らかになった場合には、スコア 1 が割り当てられました。 スコア 2 は、肺の 25% 以上 50% 未満に組織病理学が存在する肺切片に起因すると考えられました。 肺実質の 50% 以上が関与している場合、スコア 3 が割り当てられました。 ヌクレオカプシドタンパク質の発現は、前述のように、Leica BondRX 自動免疫染色プラットフォーム (Leica、米国) でウサギポリクローナル抗 SARS-CoV-2 ヌクレオカプシド抗体 (GTX135357、GeneTex, Inc, USA) を用いた DAB 色原体ベースの免疫組織化学によって評価されました 28。 ヌクレオカプシド免疫陽性面積は、HALO画像解析ソフトウェア(Indica Labs、USA)の面積パーセントアルゴリズムを使用して肺切片で測定した。

研究の検出力は、関連する最小の差が 3 倍 (0.5 log) に相当し、標準偏差が 0.3 log (つまり、以前の研究で観察されたもの) であることを考慮して、シュードウイルス中和力価に基づいて推定されました。 このような状況では、75% を超える検出力で 11 グループ間の差異を示すには、グループあたり 6 NHP のサンプル サイズが許容されると考えられました。

割り当ての時点では、ベースラインでの特性 (性別、年齢、体重) は、比較可能なグループになるようにバランスがとられていました。 ELISA力価および中和力価は、統計分析の前にlog10変換されました。

すべての統計検定は両側性であり、統計的有意性の名目レベルは、効果量推定値については α = 0.05、正規性検定については α = 0.01、交互作用項については α = 0.10 に設定されました。 分析は SEG SAS v9.4® で実行されました。

NHP 研究のすべての読み取り値とハムスター研究の ELISA 力価について、生成物、時間、およびそれらの相互作用を固定因子として、時間を反復とみなし、コホートをハムスターのランダム効果として追加した混合モデルを使用して分析を実行しました。勉強。 ハムスター研究の中和力価と、NHP 研究の Omicron BA.5 Spike 特異的 IgG 分泌メモリー B 細胞応答については、1 時点のデータしか利用できなかったため、次のような製品を使用した混合モデルを使用した一元配置 ANOVA を使用しました。固定因子とランダム効果としてのコホートが実行されました。 モデルの残差の正規性は正規確率プロットを使用してチェックされ、結果は許容できるものであると見なされました。

PsV力価と体重減少との間のスピアマン相関関係を実施した。

システム血清学の単変量解析では、GraphPad Prism バージョン 8.0 を使用して統計を計算しました。 有意性はクラスカル-ウォリス検定によって決定されました。 ヒートマップと極座標プロットは Python (バージョン 3.9.1) で作成されました。 極プロットは、各特徴の中央値パーセンタイル ランクを示します。 ヒートマップには、Z スコア付きデータが表示されます。

研究デザインの詳細については、この記事にリンクされている Nature Research レポートの概要をご覧ください。

まず、D614 またはベータ一価製剤と比較して、二価製剤の 2 つの価数間の潜在的な免疫干渉を確認しました。 ナイーブカニクイザルを、D0 と D21 に 5 μg + 5 μg の用量の二価 CoV2 preS dTM-AS03 (D614 + ベータ) ワクチン製剤、または 5 μg および 10 μg の用量の一価 CoV2 preS dTM-AS03 ワクチン (D614 またはベータ) で免疫しました。 μg の用量 (図 1)。

祖先武漢株 D614 およびベータ VOC に対する中和抗体反応を、投与 2 の 2 週間後にレンチウイルスベースのシュードウイルスアッセイ (レンチウイルス-PsV) を使用して分析しました。 二価ワクチン候補は、祖先SARS-CoV-2 D614に対して高くて一貫したnAb力価を誘発し、平均力価は3.0 log10±0.4 log10標準偏差（SD）であり（補足図1a）、一価D614によって誘発されるものと有意差はありませんでした。 5 μg (平均力価 3.1 log10) および 10 μg (平均力価 3.4 log10) で誘発されましたが、10 μg (平均力価 2.3 log10、P = 0.0017、平均増加倍数 4.9) での一価ベータワクチンによって誘発されたものよりも有意に高かった）。 二価製剤に負の免疫干渉がないことは、適格なD614水疱性口内炎ウイルス（VSV）シュードウイルスアッセイを使用して確認されました（補足図1b）。

予想どおり、二価ワクチンはすべてのマカクザルにおいてベータシュードウイルスに対する高く一貫した nAb 力価も誘発し、その平均値は 3.0 log10 ± 0.3 log10 SD で、これは 5 μg および 10 μg の一価ベータワクチンによって誘発されるものと同等でした（補足図1c) であり、10 μg の一価 D614 によって誘導されたものよりも有意に高かった (7 倍の平均増加、P < 0.001)。

全体として、二価 CoV2 preS dTM-AS03 は、D614 祖先株とベータ変異体の両方に対して強力でバランスのとれた nAb 力価を誘導し、検出可能な免疫干渉はありませんでした。

次に、他のVOC、D614G、アルファおよびデルタ（すべて元のE484位置を含む）、ガンマお​​よびミュー（ベータに存在するE484K変異を含む）、およびより遠いオミクロンBAに対して二価ワクチンによってもたらされる中和の範囲を評価しました。 1 (RBD の 15 個の変異のうち E484A 変異を含む) および SARS-CoV-1。 二価ワクチンを、同じ時点（すなわち、二回目の投与から２週間後）の一価ワクチン製剤と比較した（図２ａ）。

6 匹のナイーブマカクザルのグループを、二価ワクチン (5 μg + 5 μg)、一価 D614 または一価ベータ (10 μg) で 3 週間間隔で 2 回免疫しました。 中和抗体力価を、2回目の投与から2週間後に測定した。 a 投与後2週間における、祖先型D614およびプロトタイプD614G、懸念される変異体（アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ、ミュー、およびオミクロンBA.1）およびSARS-CoV-1に対するレンチウイルスベースのシュードウイルス中和抗体力価2 . 個々のマカクのデータが示されました。 b ヒト回復期血清パネル (N = 93) を D614 祖先偽ウイルスに対してアッセイし、比較対照としてプロットしました。 破線は、抗 SARS-CoV2 免疫グロブリン (ヒト) の世界保健機関 (WHO) 国際標準 NIBSC コード: 20/136 を表します。 水平の点線は、アッセイの定量限界を示します。 棒は平均値と 95% 信頼区間を表します。

二価ワクチンは、オミクロン BA.1 を除くすべての VOC に対して高く均一な nAb 力価を誘発し、平均力価はデルタに対する 2.8 log10 からガンマに対する 3.5 log10 の範囲でした。 一価 D614 ワクチン (10 μg) と比較すると、二価ワクチンは、D614、D614G、アルファ、デルタに対して同等の nAb 力価を示しましたが (平均力価は 3 ～ 3.5 log10)、ベータ、ガンマ、およびミューに対してはより高い nAb 力価を示しました (平均力価は 2.2 ～ 2.4 log10、P < 0.001、平均増加倍数は 6.1 ～ 12.2)。 逆に、ベータ一価ワクチンと比較して、二価ワクチンは、D614、D614G、アルファ、およびデルタに対してより高いnAb力価を誘導しましたが（平均力価2.1から2.5 log10、平均増加倍数3.3から5.8、P < 0.05）、対するnAb力価は同等でした。ベータ、ガンマ、およびミュー（平均力価は 2.9 ～ 3.3 log10）。

オミクロン BA.1 および SARS-CoV-1 では、二価ワクチンはすべての動物で検出可能な力価を誘導し、平均力価は約 2.0 log10 でしたが、nAb 応答は一価ワクチン群でよりばらつきがありました。

この結果は、祖先/ベータ二価ワクチン候補が、元の E484 含有ウイルス (D614、D614G、アルファ、およびデルタ)、E484K 含有ウイルス (ベータ、ガンマ、およびミュー) 以下に対して強力でバランスの取れた nAb 応答を誘発することを示しています。しかし、遠方の Omicron BA.1 (E484A) および SARS-CoV-1 に対しては一貫した nAb 応答が見られました。

比較のために、二価ワクチンは、世界保健機関 (WHO) の抗 SARS-CoV-2 免疫グロブリンの国際標準 (NIBSC コード: 20/136; 当社のレンチウイルス-シュードウイルスアッセイでは 2.8 log10) で測定された値よりも高い平均 D614 nAb 力価を誘発しました。 ）、93 人の回復期ヒト血清のパネルで測定された値よりも高かった（PCR 検査陽性後 3 か月以内に収集、2.0 log10、図 2b）。 2020 年 12 月 10 日に WHO 生物学的標準化専門委員会によって採択された抗 SARS-CoV-2 免疫グロブリンの国際標準では、さまざまな中和アッセイで生成された D614 に対する力価の比較が可能であり、1000 UI/の効力が割り当てられています。 mL29。

交差中和における異種プライム/ブースト免疫の利点を評価するために、2 つの代替免疫レジメンをテストしました。ここでは、一価 D614 (5 μg) による初回投与 (D0) に続いて、一価 D614 (5 μg) による 2 回目の投与 (D21) を行いました。ベータ (5 μg) または二価 (5 μg + 5 μg) ワクチン (補足図 2a)。

一価 D614 ワクチンの 2 回投与レジメンと比較して、一価ベータの 2 回目の注射ではベータおよびその他の VOC に対する中和反応の幅を広げることができましたが、二価の 2 回目の注射では幅は改善されませんでした。 しかし、2回目の注射の一価ベータによる異種プライム/ブーストは、二価ワクチンの2回投与レジメンよりも高い変動とわずかに低い力価を誘発しました（D614、D614G、アルファ、およびデルタの平均nAb力価、3-および4.1-では有意ではありません）。ベータ、P = 0.0165およびガンマ、P = 0.0052の平均nAb力価はそれぞれ低い）（補足図2b）。

中和抗体の減少の可能性に対処するために、我々は、二価および一価ワクチン製剤を用いたワクチン接種後最長 1 年 (D365) までのワクチン接種動物の血液中のプロトタイプ D614G、ベータ、およびオミクロン BA.1 に対する nAb 力価を 10 で測定しました。 μg の総抗原量 (図 3)。

a プロトタイプ D614G SARS-CoV-2、b ベータ変異体、および c オミクロン変異体 (BA.1) に対するシュードウイルス中和抗体力価を、カニクイザルにおいて一価 D614 (10 μg)、一価ベータ (10 μg) または二価 D614 + ベータ (5 μg + 5 μg)。 個々のマカクのデータを示します (N = 6/グループ)。 接続線は平均応答を示し、水平の点線はアッセイの定量限界を示します。

各ワクチン製剤について、プロトタイプ D614G およびベータ変異体に対する nAb 力価は、D34 にピークに達し、D70 または D114 まで減少し、その後、最長 1 年間 (D365) 安定したままでした。 1年後、プロトタイプD614Gおよびベータ変異体に対する平均nAb力価は、それぞれ二価ワクチンで2.7および2.5 log10、D614一価ワクチンで2.8および1.8 log10、そして一価ベータワクチンで2.4および2.6 log10であった（図1）。 3a、b)。

Omicron BA.1 に対する中和力価を D0、D34、D206、および D365 に評価し、1 年目に BA.4/5 に対して評価しました。 一価D614ワクチングループを除き、すべての動物は最長1年まで検出可能なBA.1 PsV nAb力価を有していた（図3c）。 1年後のOmicron BA.1（図3c）およびBA.4/5（図4）に対する平均nAb力価は、それぞれ、二価については2.2および2.0 log10、一価D614については1.7および1.7 log10、および2.1でした。一価ベータの場合は 1.7 log10。

個々のマカク血清中のオミクロン BA.4/5 に対するシュードウイルス中和抗体力価を示します (N = 6/グループ; ベータ一価ワクチングループでは 1 つのサンプルが欠落していました)。 ブルーダイヤモンド：二価D614+ベータ配合。 黒四角：D614配合。 紫色の点: ベータ製剤。 棒は平均応答を示し、水平の点線はアッセイの最低希釈の逆数に対応します。

3か月（D114）のアルファおよびガンマ平均nAb力価は、二価ワクチングループでそれぞれ2.6と2.6 log10、一価D614で2.7と2.1 log10、一価ベータで2.3と2.8 log10でした（補足図3a、 b）。 7か月（D206）でのデルタバリアント平均nAb力価は、2.1 log10（二価）、2.2 log10（一価D614）、および1.8 log10（一価ベータ）でした（補足図3c）。

興味深いことに、交差中和反応では、ワクチン相同中和反応よりも減衰が顕著ではないようでした。 注目すべきことに、交差中和反応はワクチン相同中和反応よりも低い力価でピークに達する傾向がありました（図3および補足図3）。 したがって、同種中和力価と異種中和力価の差は、2回目の投与後2週間の場合よりも免疫化後1年の方が小さかった。 これは特に Omicron BA.1 に当てはまり、D34 から 1 年の間、3 つのワクチン製剤すべてで有意な nAb 力価の低下は観察されませんでした。

実験データに基づいて Ab 減衰をモデル化すると、最初の減衰の後、プロトタイプ D614G nAb 力価は、D98 の 2.6 log10 で二価グループのプラトーに達し、1 年 (D365) まで安定した状態を維持することが示されました。 一価の D614 10 μg グループでは、D89 でプラトーに達し、平均力価は 2.8 log10 と推定されました。 一価ベータ 10 μg グループでは、D34 に 2.3 log10 でプラトーに達し、このグループでは 1 年間にわたって D614G nAb が減衰しないことが示されました。

ベータ nAb 力価はすべてのグループでプラトーに達し、二価、一価 D614、および一価ベータについてそれぞれ、D111 で 2.4 log10、D113 で 1.8 log10、D114 で 2.5 log10 と推定されました。

Omicron BA.1 nAb 力価に関しては、免疫化後に評価された時点（D34、206、および 365）が少なかったため、数学的モデルは実行されませんでしたが、それにもかかわらず、D34 から 1 年（D365）まで統計的に有意な時間効果は観察されませんでした。中和力価は 1 年以上安定していました。

1 年後、祖先 D614 およびオミクロン BA.5 スパイク特異的 IgG 分泌メモリー B 細胞応答が、3 つのワクチン群すべて、すなわち二価、一価 D614、および一価ベータのすべてにわたって同様のレベルですべての動物で検出されました（図 5）。 総 IgG メモリー B 細胞に調整すると、応答はグループ内で非常に均一でした。 祖先 D614 S 特異的/総 IgG 分泌メモリー B 細胞の中央値は、二価、一価 D614、および一価ベータ ワクチン グループでそれぞれ 0.46、0.19、および 0.39% でした。 一価の D614 製剤と比較して、二価および一価のベータ グループで有意に高い祖先 D614 スパイク記憶 B 細胞が検出されました。 Omicron BA.5 S 特異的/総 IgG 分泌メモリー B 細胞の中央値は、二価、一価 D614、および一価ベータ ワクチン グループでそれぞれ 0.21、0.19、0.29% であり、グループ間に有意差はありませんでした。

祖先型 D614 スパイクおよび b Omicron BA.5 スパイクに対する二価および一価の CoV2 preS dTM-AS03 ワクチンによって誘導された 1 年後のスパイク特異的 IgG 分泌メモリー B 細胞応答。 記号は、二価ワクチン (5 μg + 5 μg) (青いひし形)、一価 D614 (10 μg) (黒い四角)、または一価ベータ (10 μg) (紫色の点) およびバーは各グループの中央値を示します。

中和抗体に加えて、SARS-CoV-2 感染の排除に寄与することが以前に示されているように、Fc 受容体結合および抗体エフェクター機能も評価されました30。 二価製剤は、5μgおよび10μgの一価ワクチン製剤と比較して、D614およびベータスパイクに対する同様のIgG1力価およびFcR2a結合抗体を誘発しました（図6a、b）。

a ドット プロットは、D614 (左) またはベータ (右) スパイクに対する IgG1 力価を示します。 b ドットプロットは、祖先 D614 (左パネル) またはベータ (右パネル) スパイクに対する FcR2a 結合力価を示します。 c ドット プロットは、祖先 D614 (左) またはベータ (右) スパイクに対する抗体依存性細胞食作用 (ADCP) を示します。 d ドットプロットは、祖先 D614 (左) またはベータ (右) スパイクに対する抗体依存性補体沈着 (ADCD) を示します。 e ヒートマップは、祖先 D614 スパイク (左) またはベータ スパイク (右) に対して測定されたすべての抗体特徴の中央値 Z スコアを示します。 有意性は、Kruskal-Wallis 検定とその後の多重比較のための事後 Benjamini-Hochberg p 値補正によって決定されました。 MFI 平均蛍光強度。 a～d 記号は、二価ワクチン (5 μg + 5 μg) (黒点)、5 μg の一価ワクチン (赤点)、または 10 μg の一価ワクチン (緑の点) で免疫したマカクの個体値を表し、バーは中央値を示します。各グループの。

次に、これらの異なるワクチン製剤の抗体が細胞エフェクター機能を誘導する能力を測定しました。 二価製剤は、10μgの一価製剤と比較して、D614スパイクに対する抗体依存性細胞食作用（ADCP）の誘発が有意に少ないことがわかりました（図6c）。 抗体依存性補体沈着（ADCD）を誘発する抗体の能力については、有意差は観察されなかった（図6d）。

広いレベルで二価製剤と一価製剤の違いを理解するために、D614（図6e、左パネル）またはベータに対するすべての測定された抗体力価、FcR結合、および抗体エフェクター機能のZスコアのヒートマップをプロットしました。 (図6e、右パネル)。 この分析では、二価製剤と一価製剤を区別する特定のパターンは明らかになりませんでした。 これらのデータは、二価製剤が一価製剤に匹敵する強力な IgG サブクラス抗体力価および FcR 結合機能を誘導することを強調しています。

さまざまな製剤によって誘発されるエフェクター機能のさらなる分析が、Omicron バリアント (BA.1) Spike に対して実行されました。 Omicron Spike に対する IgG1 結合力価は、IgG1 D614G 結合と高度に相関していましたが (補足図 4a)、以前の研究で示されているように結合の低下を示しました 31。 二価製剤は、5μgおよび10μgの一価製剤D614およびベータと比較して、同様の力価（補足図4b）および同様のFcR2aおよびFcR3a結合（補足図4c）で、オミクロンに対するスパイク特異的抗体を誘導しました。 すべての製剤が同様の抗体依存性細胞および好中球の食作用（それぞれADCPおよびADNP）を誘導したのに対し、10μgのベータ一価製剤は5μgのベータ一価製剤よりも高いADCDを誘導し、他のすべての製剤よりも高い傾向を示しました（補足図4d）。 。 ADCD 活性の増加が単にワクチン用量の増加によるものなのか、それとも Omicron に対する IgM の誘導によるものなのかは不明です。

最後に、二価ワクチン製剤がより広範囲の抗体反応を誘発するかどうかを理解するために、二価製剤と 4 つの一価製剤の IgG1 力価の中央値パーセンタイル ランクを D614G、オミクロン、アルファ、ベータ、デルタ スパイクに対してプロットしました (補足)図4e)。 この分析は、10 μg の二価製剤と 2 つの一価 D614 およびベータ製剤が、5 μg の一価製剤よりも広範な IgG 応答を提供する可能性があることを示唆しています。

次に、ゴールデンシリアンハムスターにおいて、プロトタイプD614G、アルファおよびベータ変異体によるウイルス攻撃によって引き起こされるウイルス複製および肺病変に対して、二価ワクチンによって与えられる保護を調査しました。 32 匹のハムスターからなる 3 つのコホート（それぞれ 8 匹ずつ 4 つのグループに分けた）を、緩衝液（対照群）、一価 D614、一価ベータ、または二価（D614 + ベータ）CoV2 preS dTM-AS03 のいずれかで 2 回投与を使用して免疫化しました。 D0/D21 レジメン、筋肉内経路による各抗原 1 μg (図 7a)。 2回目の投与から4週間後、各コホートは、プロトタイプD614G、アルファまたはベータウイルスのいずれかで、10～20％の体重減少を誘導することが事前に特徴づけられた感染用量を用いて攻撃された。

研究スキーマ。 ハムスターは、D0 および D21 に二価 D614 + ベータ (1 μg + 1 μg) および一価 D614 またはベータ (1 μg) でワクチン接種されました。 b S 特異的 IgG 力価は、2 価ワクチン (青いひし形)、D614 1 価ワクチン (黒い四角)、またはベータ 1 価ワクチン (紫色の点) で免疫化された個々のハムスターにおいて、D0、D21 (初回投与後) にアッセイされました。およびD35（2回目の投与後）。 c プロトタイプD614G、アルファ、デルタ、およびベータ変異体に対するPsV nAb力価を、ワクチン接種したハムスターとワクチン接種していないハムスターで35日にアッセイしました。 記号は個々のデータを表し、棒はグループの平均を表します。 水平の点線は、アッセイの最低希釈の逆数に対応します。

チャレンジの前に、レンチウイルス-シュードウイルスアッセイを使用して、ワクチン接種済みおよびワクチン接種を受けていないハムスターの血清中のプロトタイプ D614G、アルファ、ベータ、およびデルタ VOC に対する S 特異的 IgG (ELISA) および nAb 力価を評価しました。 異なるワクチン製剤は、最初の注射から 21 日後に、D614 およびベータ一価ワクチン群のそれぞれ 1 匹と 2 匹のハムスターを除くすべてのハムスターに S 特異的 IgG を誘導しました。 図7bに示すように、平均IgG力価は3.2から3.5 log10 ELISA単位（EU）の範囲で変動し、すべてのワクチングループで同等でした。 平均 S 特異的 IgG 力価は、2 回目の投与から 2 週間後に約 5.0 log10 EU まで増加しましたが、異なるワクチン製剤間で統計的に有意な差はありませんでした。 マカクザルでの以前の観察と一致して、二価ワクチン製剤は、プロトタイプD614G、アルファ、デルタ、およびベータに対してD35で高くバランスの取れたnAb力価を誘発し、平均力価は2.7〜3.2 log10でした（図7c）。 一価の D614 製剤は、プロトタイプ D614G、アルファ、デルタに対して高くバランスの取れた nAb 力価を誘導しましたが (平均力価は 2.9 ～ 3.1 log10)、nAb はベータに対してより低かった(平均力価は 1.5 log10)。 一価 D614 ワクチンを接種した 2 匹のハムスターは、2 回目の投与から 2 週間後に、S 特異的 IgG 力価が低く (3.0 および 4.2 log10 EU)、検出可能な nAb 力価を示さなかったことは注目に値します。 逆に、一価ベータ製剤は、相同ベータシュードウイルスに対して高いnAb力価のみを誘導し（平均力価3.1 log10）、プロトタイプD614G、アルファ、およびデルタに対して低いnAb力価を誘導しました（平均力価1.9〜2.5 log10;図7c）。 これらのデータは、2 つの抗原間に免疫干渉がないことを示すマカクザルでの我々の観察と一致しています。

二価製剤では、一価 D614 製剤 (38 倍、P < 0.001) と比較して、ベータに対する統計的に有意に高い nAb 力価が観察され、プロトタイプ D614G (6.5 倍、P < 0.001)、アルファ (3.7 倍、P < 0.001)一価ベータワクチンと比較した nAb 力価は、P = 0.0144) およびデルタ (7.3 倍、P < 0.001) でした。

プロトタイプ (D614G) および変異体 (アルファおよびベータ) に対する防御を評価するために、疾患進行のマーカーとして体重変化を攻撃後 7 日間モニタリングし、D4 または D7 の剖検後に肺のウイルス量と病理を評価しました。半分は動物。 ワクチン接種を受けていないハムスター（緩衝液）は、ベータおよびアルファによる攻撃の7日後に体重の最大18％減少し、プロトタイプD614G攻撃後は最大10％減少しました（図8a）。一方、攻撃を受けていないハムスターの体重は、攻撃中に安定したままかわずかに増加しました。同じ時期。 D614一価ワクチンでワクチン接種した2匹の低反応性ハムスター（nAb力価なし）を除いて、ワクチン製剤が何であれ、ワクチン接種したすべてのハムスターは、攻撃を受けなかったグループと同じプロフィールに従って、攻撃後に安定した体重またはわずかに増加した体重を示した。

二価 D614 + ベータ (1 μg + 1 μg) および一価 D614 またはベータ (1 μg) でワクチン接種されたハムスターを、接種の 28 日後にプロトタイプ D614G、アルファ、またはベータ ウイルスで攻撃しました (N = 8/グループ)。 2回目の投与。 a 攻撃後の 7 日間、個人の体重変化を毎日評価しました。 記号は個々のデータを表し、線はグループの平均を表します。 b 感染力価測定によるウイルス量、c 病理スコア（影響を受けた組織の％に基づく: 0 = 0%; 1 < 25%; 2 = 25 ～ 50%; 3 > 50%）、および d ヌクレオカプシドタンパク質面積率は、次のように評価されました。攻撃から 4 日または 7 日後の個々のハムスターの肺。 バーは病理スコアおよびヌクレオカプシドタンパク質面積パーセンテージのグループの中央値を表し、破線は検出限界を表します。

50% 組織培養感染量 (TCID50) 滴定を使用して、攻撃の 4 日後および 7 日後に肺のウイルス量を測定しました (グループあたりおよび時点あたり動物の半数)。 各コホートにおいて、ワクチン接種を受けていないグループ（緩衝液）は、チャレンジ後4日目に高いウイルス量を示し、D614G、アルファ、ベータコホートではそれぞれ平均ウイルス量8.8 log10、8.6 log10、および8.3 log10 TCID50でした（図8b）。 。 攻撃後4日目には、二価または一価ベータワクチンを接種したハムスターは、攻撃に使用したウイルス(D614G、アルファ、またはベータ)に関係なく、低いウイルス量または検出不可能なウイルス量を示しました。 一価 D614 ワクチンを接種したハムスターも、体重減少と一致する高いウイルス量を示し、nAb 力価が検出できなかったアルファ攻撃コホートの 2 匹のハムスターを除いて、D4 では低ウイルス量または検出不可能なウイルス量を示しました。 一価 D614 をワクチン接種した 1 匹のハムスターも、ベータ変異体を接種したコホートで高いウイルス量を示しました。

3 つのコホートでは、攻撃後 7 日間の感染力価は低いか検出不能でした。

次に、ヘマトキシリン・エオシン（H&E）で染色した肺切片、または抗SARS-CoV-2ヌクレオカプシドタンパク質免疫組織化学（IHC）を行った肺切片の顕微鏡評価により、攻撃後4日および7日の肺の病理を評価した。 3つのウイルス株すべてについて、ワクチン接種されていないハムスター（バッファー）の病理は、マクロファージ、リンパ球、異好球、および合胞体細胞で構成される炎症性浸潤の多巣性から融合領域で構成され、出血および細胞残骸が混合され、通常の構造を破壊することがよくありました（図9aおよび補足図） .5）。 顕著なII型肺細胞過形成があり、細気管支上皮は、多数の上皮細胞が積み重なり、稀な壊死細胞が点在することを特徴とする多病巣性過形成であった。 いくつかの細気管支の内腔には、壊死した細胞残骸が含まれていました。 血管は、混合炎症性浸潤による壁浸潤または血管周囲浸潤のいずれかを示します。 ワクチン接種を受けたハムスターでは肺の病状が著しく軽減されました。 半定量的スコアは、影響を受けた肺の割合に基づいて作成されました。

a 代表的な低倍率 (8 倍) の顕微鏡写真 (H&E)。 緩衝液のみ、一価 D614 またはベータ (1 μg) および二価 D614 + ベータ (1 μg + 1 μg) ワクチンを投与されたハムスターの肺を、プロトタイプ D614G、アルファ、およびベータによる攻撃から 7 日後に H&E 染色後に評価しました。ウイルス。 矢印 = 炎症性浸潤、II 型肺細胞過形成、濃い紫色の領域で表される細胞残骸。 b プロトタイプ D614G、アルファ、およびベータ ウイルスによる攻撃から 4 日後のハムスターの肺におけるヌクレオカプシド タンパク質発現を免疫組織化学によって分析しました。

ワクチン接種を受けていないすべてのハムスターは、プロトタイプD614Gおよびアルファによる攻撃の4日後、肺病理スコア中央値2（0〜3のスケール）であり、ベータで攻撃されたグループのスコアは1または2でした（図8c）。 攻撃から 7 日後、攻撃に使用した系統に関係なく、ワクチン接種を受けていないすべての動物で病状が最大スコア 3 まで進行しました。 対照的に、一価または二価ワクチンでワクチン接種されたハムスターは、D614 でワクチン接種され、アルファ変異体で攻撃された 2 匹の低反応性ハムスターを除いて、攻撃後 4 または 7 日目に病理が全く示されないか、または最小限の病状 (スコア 0 または 1) を示しました。スコアは 2 と 3 であり、ウイルス量が高いことと一致しています。 同じコホート（アルファチャレンジ）では、一価ベータワクチンを接種した 1 匹のハムスターは、チャレンジ後 2、4 日のスコアを示しました。 しかし、事後分析では、同様のスコアを有する緩衝液免疫対照よりも病理が進行していないことが示された。 さらに、免疫組織化学では、ワクチン未接種ハムスターの肺の多病巣性から癒合領域までの攻撃後4日目にヌクレオカプシドタンパク質の発現が示されたが、ヌクレオカプシドタンパク質は、一価ワクチンで免疫した2匹の低応答動物を除いて、同じ時点でどのワクチン接種ハムスターでも検出されなかった。 D614 ワクチン (図 8d、9b)。

全体として、二価 D614/ベータ ワクチンと 2 つの一価 CoV2 preS dTM-AS03 (D614 およびベータ) ワクチンは、体重減少、肺でのウイルス複製、およびプロトタイプ D614G、アルファ、または D614G、アルファ、またはベータ版。

SARS-CoV-2の感染は世界の多くの地域で依然として制御されておらず、オミクロンやその亜変異株などのワクチン耐性変異株の出現は、祖先武漢株D614に基づくワクチン追加免疫戦略の限界を浮き彫りにし、ワクチンの開発を刺激している。変異体スパイクに基づく新しいワクチンブースター製剤32、33、34、35、36。

ここでは、祖先 D614 およびベータ (B.1.351) 変異株の融合前安定化スパイク三量体を含む AS03 アジュバントを含む二価組換え CoV2 preS dTM ワクチン製剤によって付与される免疫原性と有効性を、ナイーブ NHP およびハムスターにおいて評価しました。一次予防接種シリーズ。 NHP モデルは、COVID-19 ワクチンの免疫原性について高い予測性を持っており、ゴールデン シリアン ハムスターは、SARS-CoV-2 変異体によって引き起こされる病理に対するワクチンの有効性を評価するための最適なモデルであることが証明されています 37,38。

私たちの研究の結果は、D614/ベータ二価タンパク質ベースのCoV2 preS dTM-AS03ワクチンによって最長1年までのNHPに付与される広範囲かつ持続的な免疫原性を実証しています。 具体的には、二価ワクチンは、ワクチン相同ウイルス (D614、D614G、ベータ) およびアルファ、ガンマ、デルタ、およびミュー VOC に対して高い中和抗体反応を誘導し、3 ～ 12 か月で安定したレベルに達します。 重要なことは、この二価ワクチンは、2003 年の流行による SARS-CoV-1 に対する交差中和抗体と、オミクロン BA.1 および BA.4/5 に対する一貫した持続性の交差中和抗体も誘発することです。 また、3 つの製剤による免疫化の 1 年後に、スパイク特異的記憶 B 細胞 (祖先 D614 および Omicron BA.4/5) の高レベルの誘導も測定しました。 さらに、二価ワクチン製剤中の 2 つの抗原 (D614 およびベータ CoV2 preS dTM) の組み合わせは、一価製剤と比較した場合、いずれの抗原の免疫原性も低下しませんでした。 二価製剤によって誘発される広範な交差中和反応は、変異体の中和に関して反対のプロファイルを示す 2 つのワクチン成分の相加効果によって説明できます。 実際、D614 一価ワクチンは、元の E484 アミノ酸を含む D614G、アルファ、およびデルタに対する交差中和抗体を誘導しますが、ベータ一価ワクチンは、抗体エスケープのほとんどの原因となる E484K 変異を含むガンマおよびミューに対する交差中和抗体を誘導します20。 。 はるかに遠い Omicron 変異体 (E484A 変異を持つ) の一貫した中和は、各一価ワクチンで準優勢である可能性のある保存されたエピトープに対する相補的または相乗効果の結果である可能性があります 39,40。

中和の結果を補足するために、広範なシステム血清学分析により、二価製剤が各一価製剤と比較して全体的に同様の IgG サブクラスおよび Fc 機能を誘発することが示されました。

興味深いことに、二価ワクチンを使用した 2 回投与の免疫レジメンを、一価 D614 の後に一価ベータまたは二価ワクチンを投与した代替の異種免疫レジメンと比較したところ、一価ベータの 2 回目の注射のみがバランスの取れた中和反応を誘導し、ばらつきが大きかったのです。 ２価ワクチンを２回接種します。 異種プライム/ブーストのパフォーマンスの低下は、S トリマー ワクチン (D0 に D614、D21 にベータ) による異種ワクチン接種で低 nAb (祖先、アルファ、ベータ、ガンマ) を誘導したマウスでも観察されました。 -二価ワクチンの投与41。 D614/ベータ異種レジメンを用いた我々の研究で観察された反応の幅が限られているのは、NHPとヒトにおける後期追加免疫ワクチン接種後に最近観察された中和反応の幅が広がっているのとは対照的である14、15、16。 これは、初回免疫の直後（追加ワクチン接種の場合は 6 か月から 1 年であるのに対し、ここでは 3 週間）に 2 回目の注射を行った場合、記憶 B 細胞集団が成熟しないことに関連している可能性があります 42,43。 異種 D614 プライム/二価追加免疫レジメンでは、観察された D614 Ab プロファイルは「元の抗原罪」に対応し、最初の曝露が追加免疫ワクチン接種によって誘発される Ab 反応を決定します 44,45。一次免疫は胚中心を効率的に活性化し、時間の経過とともにより広範な抗体反応を生成します46。

この研究では、異なる CoV2 preS dTM-AS03 ワクチン製剤を用いた 2 回の初回投与後、3 ～ 12 か月の間の中和力価の安定性が示されました。 これは、ヒトにおいて同様の期間（D209まで）にわたってmRNA-1273ワクチンで観察された連続的なnAb減少とは対照的である47。

私たちの知る限り、これらは、NHP で 2 回の初回予防接種後 12 か月までに発生するすべての VOC をカバーする広範な交差中和を示す最初のデータです。 以前の研究では、二価ベースまたはナノ粒子ベースのワクチン候補が、VOC に対するバランスの取れた中和抗体応答を誘導できることが示されていましたが、データはマウスに限定されているか、より限定された変異体のパネルで記録されていました 41、48、49、50。 スパイクフェリチンナノ粒子または RBD フェリチンナノ粒子に基づく他の候補は、SARS-CoV-1 に対する同様の幅広さと抗体耐久性を示しました。 ただし、これらの候補は臨床開発の初期段階にあります51、52、53。 mRNA およびタンパク質ベースのワクチンによる Ab 応答の持続性をよりよく理解するには、長寿命形質細胞および記憶 B 細胞コンパートメントに関する今後の研究が正当化されるでしょう。

この研究では、ベータ含有二価ワクチン製剤が、D614G、アルファ、およびベータ変異体による攻撃後の肺の病状およびウイルス複製から保護されるハムスターにおけるワクチンの有効性も示しました。 感染および病理に対する防御は、一価製剤による免疫化によって誘発された交差中和抗体力価の低下を伴う動物で観察され、異種感染の状況において疾患の増強がないことが裏付けられた。 注目すべきことに、一価D614ワクチン群の2匹のハムスターは、2回目の投与から2週間後に、低い抗体結合力価(ELISA)を示し、検出可能な中和抗体力価を示さなかった。 これらの観察は、攻撃後の感染の臨床徴候 (体重減少、ウイルス複製、および肺の病理) と相関していました。 探索的分析により、病理に対する防御は検出可能な中和抗体力価と関連していることが示されました。 ただし、しきい値は特定できませんでした。 変異体に対する防御の閾値を定義し 54,55、ワクチン防御におけるワクチン誘発交差反応性 T 細胞応答の役割を調査するには、今後の研究が必要となるでしょう 56。

ここで紹介する研究では、グループあたりの動物数が少なく、予防接種直後に防御を評価しましたが、その結果は最近、大規模な有効性臨床試験 (NCT04904549) で確認され、オミクロンによる一次免疫後に、症候性感染に対する高レベルの防御が実証されました。ベータ含有二価 CoV2 preS dTM-AS03 ワクチン57。 興味深いことに、他の2つの第3相臨床試験（NCT04762680、NCT05124171）では、ベータ一価CoV2 preS dTM-AS03ワクチンが、以前にmRNA COVID-19ワクチンで初回刺激された成人におけるOmicron nAbの増強においてD614ベースのワクチンよりも有意な優位性を示した16,17。 。

免疫回避変異体を選択する継続的な急速なウイルス進化を考慮すると、若年者やまだワクチン接種を受けていない人々などの未接種集団と、以前にワクチン接種を受けた集団の両方が、ベータ含有CoV2 preSによってもたらされる広範で耐久性のある免疫応答の恩恵を受ける可能性があります。 dTM-AS03 ワクチン製剤。

タンパク質配列は、原稿で提供されているアクセッション コードを使用して GISAID で入手できます: B.1.351 配列 GISAID Accession EPI_ISL_1048524。 この研究で生成されたソース データは補足データ 1 として提供されます。他のすべてのデータは、合理的な要求に応じて対応する著者 (または、該当する場合は他の情報源) から入手できました。

欧州疾病予防管理センター。 疫学最新情報: SARS-CoV-2 オミクロン亜系統 BA.4 および BA.5。 （2022年）。

Yewdell、JW 抗原変動: 新型コロナウイルス感染症の理解。 イミュニティ 54、2681–2687 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

アンドリュース、N.ら。 Omicron (B.1.1.529) 変異株に対する Covid-19 ワクチンの有効性。 Ｎ．Ｅｎｇｌ． J.Med. 386、1532–1546 (2022)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Magen, O. et al. 全国規模でのBNT162b2 mRNA Covid-19ワクチンの4回目の接種。 N.Eng. J.Med. 386、1603–1614 (2022)。

記事 CAS Google Scholar

Markov, PV、Katzourakis, A. & Stilianakis, NI 抗原の進化は、予測不可能な重症度を伴う新しい SARS-CoV-2 変異種をもたらすでしょう。 ナット。 Rev.Microbiol. 20、251–252 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cao、Y.ら。 BA.2.12.1、BA.4、および BA.5 は、Omicron 感染によって誘発される抗体から逃れます。 ネイチャー 608、593–602 (2022)。

池谷 晋 ほか SARS-CoV-2 オミクロン亜系統の抗体回避特性。 ネイチャー 604、553–556 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

カーン、Ｋ．ら。 オミクロン BA.4/BA.5 は、BA.1 感染によって誘発される中和免疫を回避します。 ナット。 共通。 13、4686 (2022)。

Wang, Q. et al. SARS-CoV-2 Omicron サブバリアント BA.2.12.1、BA.4、および BA.5 による抗体回避。 ネイチャー 608、603–608 (2022)

Chalkias、S、他。 Covid-19 に対する二価のオミクロンを含む追加免疫ワクチン。 Ｎ．Ｅｎｇｌ． J.Med. 387、1279–1291 (2022)。

スワンソン、KA ファイザー/BioNTech 新型コロナウイルス感染症 (Omicron) 改変ワクチンのオプション。 ワクチンおよび関連生物由来製品諮問委員会のプレゼンテーション、2022 年 6 月 28 日。 https://www.fda.gov/media/159496/download。

マーティン、B.ら。 米国国家新型コロナウイルスコホート共同研究における小児における SARS-CoV-2 感染に関連する特徴、転帰、重症度の危険因子。 自工会ネットワーク。 5、e2143151 (2022) を開きます。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Sridhar, S. et al. 健康な成人における AS03 アジュバント添加 SARS-CoV-2 組換えタンパク質ワクチン (CoV2 preS dTM) の安全性と免疫原性: 第 2 相無作為化用量設定多施設共同研究の中間所見。 ランセット感染。 ディス。 22、636–648 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

パボット、V. et al. タンパク質ベースのSARS-CoV-2スパイクワクチンブースターは、ヒト以外の霊長類で懸念されるSARS-CoV-2変異種に対する交差中和を高める。 ナット。 共通。 1699 年 13 日 (2022 年)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

パボット、V. et al. ベータ変異型 COVID-19 タンパク質追加免疫ワクチンは、非ヒト霊長類の SARS-CoV-2 変異型に対する持続的な交差中和を誘発します。 ナット。 共通。 1309 年 14 月 (2023 年)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Launay, O. et al. ベータアジュバント添加組換えブースターワクチンの免疫原性と安全性。 Ｎ．Ｅｎｇｌ． J.Med. 387、374–376 (2022)。

de Bruyn、G. et al. 承認されたワクチンで初回刺激された成人における、ブースターとして AS03 アジュバントを使用した変異型適応 SARS-CoV-2 組換えタンパク質ワクチンの安全性と免疫原性。 medRxiv (2022) でのプレプリント。

ウィブマー、CK et al. SARS-CoV-2 501Y.V2は、南アフリカの新型コロナウイルス感染症（COVID-19）ドナー血漿による中和を免れた。 ナット。 医学。 27、622–625 (2021)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Planas, D. et al. 中和抗体に対する感染性 SARS-CoV-2 B.1.1.7 および B.1.351 変異体の感受性。 ナット。 医学。 27、917–924 (2021)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

チェン、RE 他モノクローナル抗体および血清由来のポリクローナル抗体による中和に対する SARS-CoV-2 変異体の耐性。 ナット。 医学。 27、717–726 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ゴベイル、SMら。 SARS-CoV-2 の自然変異がスパイク構造、立体構造、抗原性に及ぼす影響。 サイエンス 373、eabi6226 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

フランチカ、JR 他 SARS-CoV-2 スパイクタンパク質ワクチン接種によって誘発される防御抗体は、ヒト以外の霊長類の攻撃後に肺でブーストされます。 科学。 翻訳。 医学。 13、eabi4547 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

アッカーマン、メイン、他。 臨床抗体サンプルの貪食活性を測定するための堅牢なハイスループットアッセイ。 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． メソッド 366、8–19 (2011)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

カルステン、CB 他抗体媒介好中球食作用を特徴付けるための多用途のハイスループットアッセイです。 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． 方法 471、46–56 (2019)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Fischinger, S. et al. 補体活性化を誘導する抗体の能力を評価するためのハイスループットのビーズベースの抗原特異的アッセイです。 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． 方法 473、112630 (2019)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

プーレン、KM et al. SARS-CoV-2感染後の母乳への選択的機能性抗体の移行。 Cell Rep. 37、109959 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ブラウン、EP 他。 抗原特異的抗体エフェクタープロファイルを評価するための多重化Fcアレイ。 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． 方法 443、33–44 (2017)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

カルニン、KV et al. 前臨床動物モデルにおける mRNA COVID-19 ワクチン MRT5500 の免疫原性と有効性。 NPJ ワクチン 6、61 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ペンシルベニア州クリスチャンセンら。 抗 SARS-CoV-2 免疫グロブリンの WHO 国際標準。 ランセット 397、1347–1348 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zohar、T.ら。 損なわれた体液性機能進化は SARS-CoV-2 死亡率とともに追跡します。 セル 183、1508–1519.e1512 (2020)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bartsch、YC et al. オミクロン変異体スパイク特異的抗体結合と Fc 活性は、mRNA または不活化 COVID-19 ワクチンのレシピエントで保存されます。 科学。 翻訳。 医学。 14、eabn9243 (2022)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

シンガナヤガム、A. et al. 英国におけるワクチン接種者および非ワクチン接種者におけるSARS-CoV-2デルタ（B.1.617.2）変異体の市中感染とウイルス量動態：前向き縦断コホート研究。 ランセット感染。 ディス。 22、183–195 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

デイビス、NG et al. 英国における SARS-CoV-2 系統 B.1.1.7 の推定伝播性と影響。 サイエンス 372、eabg3055 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ハーベイ、WTら。 SARS-CoV-2 の変異体、スパイク変異、免疫逃避。 ナット。 Rev.Microbiol. 19、409–424 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Choi, A. et al. 健康な成人におけるSARS-CoV-2変異型mRNAワクチン追加免疫の安全性と免疫原性：中間解析。 ナット。 医学。 27、2025 ～ 2031 年 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

アトマー、R.ら。 同種および異種の Covid-19 ブースターワクチン接種。 N Engl J Med 386、1046–1057 (2022)。

アブデルナビ、R. et al. シリアンハムスターにおける新たなSARS-CoV-2変異種の感染力と毒性の比較。 EBioMedicine 68、103403 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

デグレース、MM 他。 免疫防御における SARS-CoV-2 変異体のリスクの定義。 ネイチャー 605、640–652 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Reincke、SM et al. SARS-CoV-2 ベータ変異体感染は、強力な系統特異的で交差反応性の抗体を誘発します。 サイエンス 375、782–787 (2022)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

グリーニー、AJ 他 SARS-CoV-2 変異体は、免疫優勢階層が変化した抗体応答を引き起こします。 PLoS 病原体 18、e1010248 (2022)。

サン、Ｓ．ら。 次世代タンパク質ワクチン V-01 によって誘導される SARS-CoV-2 変異株に対する広範な中和。 セル発見。 7、114（2021）。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Wang、Z.ら。 感染後 1 年で SARS-CoV-2 に対する中和範囲が自然に強化されました。 ネイチャー 595、426–431 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Muecksch、F. et al. SARS-CoV-2 mRNAブースト後の記憶B細胞の能力と範囲の増加。 Nature 607、128–134 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Davenport, FM & Hennessy, AV インフルエンザウイルスワクチンに対する抗体反応の感染およびワクチン接種による事前判定。 J.Exp. 医学。 106、835–850 (1957)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Henry, C.、Palm, AE、Krammer, F. & Wilson, PC 元の抗原性罪から万能インフルエンザウイルスワクチンまで。 トレンド免疫。 39、70–79 (2018)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Pillai, S. SARS-CoV-2 ワクチン接種は、元々の抗原の罪を洗い流します。 トレンド免疫。 43、271–273 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Luo, G.、Hu, Z. & Letterio, J. SARS-CoV-2 変異種に対する mRNA-1273 ワクチンの抗体耐久性のモデリングと予測。 medRXiv (2021) でのプレプリント。

彼、C.ら。 S1 タンパク質を標的とする二価組換えワクチンは、SARS-CoV-2 変異体と野生型ウイルスの両方に対する中和抗体を誘導します。 MedComm 2、430–441 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ウー、Ｋら。 変異型 SARS-CoV-2 mRNA ワクチンは、マウスの一次または追加免疫シリーズとして広範な中和を与えます。 ワクチン 39、7394–7400 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

アルナーチャラム、PS 他。 防御免疫を誘導するためのサブユニット COVID-19 ワクチンのアジュバント。 ネイチャー 594、253–258 (2021)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ジョイス、MG 他。 SARS-CoV-2 フェリチン ナノ粒子ワクチンは、広範な SARS コロナウイルスの免疫原性を誘発します。 Cell Rep. 37、110143 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ジョイス、MG 他。 SARS-CoV-2 フェリチン ナノ粒子ワクチンは、ヒト以外の霊長類において防御免疫反応を誘発します。 科学。 翻訳。 医学。 14、eabi5735 (2022)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

リー、D.ら。 ナノ粒子ワクチンによって引き起こされる SARS-CoV-2 の中和と防御の範囲。 ナット。 共通。 13、6309 (2022)。

ギルバート、PB et al. 免疫は、mRNA-1273 新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) ワクチンの有効性臨床試験の分析と相関しています。 サイエンス 375、43–50 (2022)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Feng, S. et al. 症候性および無症候性の SARS-CoV-2 感染に対する防御の相関関係。 ナット。 医学。 27、2032 ～ 2040 年 (2021)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Liu、J.ら。 ワクチンは、SARS-CoV-2 オミクロンに対する高度に保存された細胞免疫を誘発します。 Nature 603、493–496 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ダヤンGHら。 有効性 1 の二価 (D614 + B.1.351) SARS-CoV-2 タンパク質ワクチン。 medRxiv (2022) でのプレプリント。

リファレンスをダウンロードする

サノフィ グローバル ディスカバリー パソロジー (TIM) の組織病理学および IHC チームのメンバーには、ハムスター肺サンプルの組織学および IHC 手順において優れた技術的支援をしていただきました。著者らは、製造を調整し、研究用のワクチン抗原を提供してくれた Jon Smith に感謝します。Caroline Patriarca- Ruat 氏がプロジェクト管理を担当し、Carlos Diaz-Granados 氏、Stephen Savarino 氏、Saranya Sridhar 氏が研究デザインとデータ分析に関する重要な議論を担当しました。 著者らは、ELISAでハムスター血清を検査してくれたDean Huang氏と統計分析のサポートをしてくれたJulie Piolat氏に感謝している。 著者らはまた、編集支援と論文調整を提供してくれた Isabel Grégoire、Hardik Ashar、Priya Upadhyay、Hanson Geevarghese (Sanofi) に感謝します。 この研究は、AS03 アジュバント システムへのアクセスと使用を提供した GSK と協力して行われました。 資金の一部はサノフィによって提供され、契約番号 HHSO100201600005I に基づき米国保健社会福祉省の戦略的準備および対応局である生物医学先端研究開発局 (BARDA) から、米国国防総省との協力により提供されました。契約番号 W15QKN-16-9-1002 に基づく化学、生物、放射線および核防衛のための共同プログラム事務局。

これらの著者は同様に貢献しました: Catherine Berry、Vincent Pavot。

サノフィ、ワクチン研究開発、マルシー・レトワール、フランス

カトリーヌ・ベリー、ヴァンサン・パヴォ、アリス・ライラード、シルヴィアン・ゴースロン、ヴァレリー・ルクチュリエ

サノフィ、ワクチン研究開発、ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国

ナタリー・G・アノソワ、マイケル・キシュコ、ルー・リー、ティム・ティビッツ、ローマン・M・チッチ

米国マサチューセッツ州フレーミングハム、サノフィ

シーラ・カミングス & ディネシュ・S・バンガリ

BIOQUAL Inc、米国メリーランド州ロックビル

スワガタ・カー

MGH、MIT、およびハーバード大学のラゴン研究所、ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国

キャロライン・アティオ、イーシャン・デン、ガリット・アルター

GSK、リクセンサート、ベルギー

シンディ・ガツァイト

GSK、ワーブル、ベルギー

マルグリット・コウツコス

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

VL、TT、CB、VP、AR、SG、NGA、RMC、CG、M.Ko、CA、GA が研究のコンセプトやデザインに貢献しました。 MK、SG、AR、SG、DSB、SK、および CA は、研究とサンプル分析の実施に貢献しました。 VL、TT、CB、VP、AR、SG、NGA、RMC、CG、MK、CA、GA、CG、M.Ko がデータの解釈と原稿のレビューに関与しました。 VL、VP、CB が最初の原稿を起草しました。

ヴァレリー・ルクチュリエへの通信。

CB、VP、NGA、MK、DH、TT、AR、SG、DSB、RMC、および VL はサノフィ社の従業員であり、株式を保有している可能性があります。 SC は調査実施時点ではサノフィの従業員でしたが、現在はアッヴィに勤務しており、サノフィの株式を保有しています。 SK は Bioqual の従業員であり、矛盾は報告されていません。 GA は、SeromYx Systems Inc の共同創設者およびコンサルタントを務めており、SeromYx Systems Inc を通じて特許出願中です。CA と GA は、研究実施当時、MGH、MIT、およびハーバード大学のラゴン研究所の従業員であり、現在はモデルナに勤務しています。 YD には開示するものは何もありません。 M.Ko と CG は GSK グループ企業の従業員であり、GSK 株式の所有権を報告しています。

Communications Medicine は、この研究の査読に貢献してくれた Teresa Aydillo-Gomez と他の匿名の査読者に感謝します。 査読者レポートが利用可能です。

発行者注記 Springer Nature は、発行された地図および所属機関の管轄権の主張に関して中立を保っています。

オープン アクセス この記事はクリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされており、元の著者と情報源に適切なクレジットを表示する限り、あらゆる媒体または形式での使用、共有、翻案、配布、複製が許可されます。クリエイティブ コモンズ ライセンスへのリンクを提供し、変更が加えられたかどうかを示します。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、素材のクレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材が記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれておらず、意図した使用が法的規制で許可されていない場合、または許可されている使用を超えている場合は、著作権所有者から直接許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

Berry, C.、Pavot, V.、Anosova, NG et al. ベータ含有二価 SARS-CoV-2 タンパク質ワクチンは、マカクでは持続的な広範な中和を引き起こし、ハムスターでは防御を引き起こします。 Commun Med 3、75 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s43856-023-00302-z

引用をダウンロード

受信日: 2022 年 8 月 19 日

受理日: 2023 年 5 月 9 日

公開日: 2023 年 5 月 26 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s43856-023-00302-z

次のリンクを共有すると、誰でもこのコンテンツを読むことができます。

申し訳ございませんが、現在この記事の共有リンクは利用できません。

Springer Nature SharedIt コンテンツ共有イニシアチブによって提供